熱門搜索:ELISA試劑盒,生物試劑
新聞資訊 / news 您的位置:網站首頁 > 新聞資訊 > 明膠酶譜法MMP2/MMP9檢測試劑盒注意事項

明膠酶譜法MMP2/MMP9檢測試劑盒注意事項

發布時間: 2022-06-23  點擊次數: 96次

明膠酶譜法MMP2/MMP9檢測試劑盒注意事項


本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于 SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達1 nM,高于ELISA方法,其基本原理1 和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電泳,電泳結束后 取出凝膠與酶反應Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景, 但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區域,從而能 同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學 反應緩沖液,可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測靈敏度~1nM。試劑 盒可進行50次標準小膠檢測,如果小膠加樣孔為10~15個,則總計可檢測500~750個樣品。

6@A~ZE3JY_YTF`S4~UN$R`V.jpg


注意事項:

1.制備聚丙烯酰胺時應注意排除氣泡。

2.明膠酶譜的活性受鈣離子,鋅離子,和PH值等因素的影響,因此緩沖液配制應嚴格準確,盡量用超純水,孵育溫度也掌握好。

3.用大梳子

4.孵育液的PH最好在7.5-7.6,復性的TRITON時間長了會有絮狀物,所以實驗時盡量使用新鮮配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培養箱中,因為會改變孵育液的PH值,在普通孵箱即可。

6、細胞樣本用PBS 5倍體積震蕩裂解,估算細胞的體積,然后加入5倍體積的PBS,渦旋振蕩15-30s,而后靜置或低速離心.或者手動震蕩。

7、組織或者細胞的話可以用PBS,可以用低滲溶液如三分之一或者四分之一的生理鹽水按照5倍體積加入后震蕩裂解細胞,離心即可,步驟和提蛋白很相似即可,其實重點的步驟主要是采用低滲裂解液進行裂解,組織的話可以勻漿20-30次,然后10000轉左右離心,5分鐘取上清即可


關于40左右出現的條帶,確實是我們好多客戶實驗過程中都會出現的,像什么Hela細胞、肝癌細胞、巨噬細胞等。還是之前給您解釋的,這個和細胞類型及明膠酶家族種類是有關系的;另外由于明膠酶譜的蛋白樣品是不完全變性的,因為并沒有煮沸的過程,所以可能由于變性不充分的原因導致其分子量部位不同。我們也有好多客戶做檢測的時候會制備一個上樣的濃度梯度,下面給您附一個最近一個客戶一次實驗的結果。他的在40左右也是出了條帶的。


  • 聯系電話電話025-66060117
  • 傳真傳真
  • 郵箱郵箱njxinfan@qq.com
  • 地址公司地址南京市雨花臺區鳳集大道15號創業創新城
© 2022 版權所有:南京信帆生物技術有限公司   備案號:蘇ICP備16008122號-4   sitemap.xml   管理登陸   技術支持:化工儀器網       
  • 公眾號二維碼

聯系我們

contact us

掃一掃,關注我們

返回頂部




日本丰满熟妇videos_印度人又粗又长硬配种_在线观看免费大黄美女片_国产无人区卡一卡二卡三乱码_国产精品综合色区在线观看 <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链>